Testul ELISA 

cel mai performant în alergiile ascunse. Folosit și în detectarea HIV

ELISA

(Enzime linked immunosorbent assay)

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este o tehnică robustă și sensibilă utilizată pentru a detecta și cuantifica proteine ​​specifice în probe care pot conține amestecuri complexe de proteine.  Anticorpii sunt utilizați pentru a detecta proteinele specifice imobilizate pe suprafața godeurilor microplăcilor.  Tehnica facilitează analiza de volum mare și debit rapid, ideală pentru analiza unui număr mare de probe.

Formate ELISA

 ELISA pot fi efectuate în mai multe moduri, în funcție de specificul probei și de sensibilitatea necesară.

ELISA directă

 Proba este aplicată pe o suprafață solidă care leagă proteinele, de obicei o placă de microtitrare, acoperind analitul direct pe suprafață, dacă este prezent (Fig. A).  Apoi, se adaugă anticorpi primari conjugați reporter specifici analitului.  Semnalul de la molecula raportor conjugată direct este analizat pentru a oferi un rezultat cantitativ atunci când este utilizat cu o curbă standard de concentrație cunoscută.  În funcție de caracteristicile probei, această metodă poate avea o sensibilitate limitată.

ELISA indirectă

 Analitul este acoperit direct pe o placă de microtitrare (Fig. B).  Se adaugă proba (lichidul biologic: ser, saliva etc.) iar anticorpii specifici antigenului, dacă sunt prezenți, se leagă de analit, formând un complex.  Spălarea ulterioară îndepărtează proteinele care nu se leagă și alte componente din amestecul de probă.  Un anticorp secundar conjugat cu moleculă reporter este utilizat pentru a detecta anticorpul specific antigen legat.  Semnalul generat poate fi cuantificat prin compararea cu o curbă standard.

Sandwich ELISA

 ELISA Sandwich poate fi efectuată atât direct, cât și indirect, în funcție de nivelul de sensibilitate necesar.  Există o varietate de metode care utilizează specificitatea anticorpilor pentru a ținti diferite fragmente ale anticorpului, permițând o mai mare specificitate și versatilitate.

 Sandwich direct

 Un anticorp primar specific antigenului (analitului) de interes este imobilizat pe o placă de microtitrare și, ulterior, captează analitul din proba de testat.  Un anticorp primar conjugat raportor-moleculă specific antigenului este adăugat pentru a completa sandwich-ul.  Semnalul de la molecula reporter este observat fie prin adăugarea unui substrat enzimatic, care are ca rezultat un produs colorimetric sau fluorescență, rezultând o citire proporțională cu concentrația analitului.

Sandwich indirect

 Un anticorp primar specific antigenului (analitului) de interes este imobilizat pe o placă de microtitrare și, ulterior, captează analitul din proba de testat (Fig. C).  Un al doilea anticorp primar al unei specii gazdă diferite specifice antigenului este apoi adăugat pentru a completa sandwich-ul.  Un anticorp secundar conjugat cu moleculă reporter se leagă la al doilea semnal de amplificare a anticorpului specific antigenului.  Semnalul de la molecula reporter este observat fie prin adăugarea unui substrat enzimatic, care are ca rezultat un produs colorimetric sau fluorescență, rezultând o citire proporțională cu concentrația analitului.

Figura 1:

  A. ELISA directă.  Un anticorp primar conjugat detectează analitul legat de placă.

  B. ELISA indirectă.  Mulți anticorpi secundari conjugați sunt capabili să lege anticorpul primar, ducând la amplificarea semnalului.

  C. ELISA sandwich indirect.  Un anticorp de captură legat de placă, care leagă analitul din probă, care este apoi vizualizat folosind un anticorp secundar conjugat.

  D. Amplificarea semnalului marcat cu streptavidină-biotină (LSAB).  Anticorpii secundari biotinilați leagă anticorpul primar care a reacționat cu analitul legat de placă.  Streptavidina conjugată se leagă apoi la mai multe molecule de biotină de pe anticorpul secundar, conducând la amplificarea maximă a semnalului.

Flux lateral

 Testele de flux lateral la punctul de îngrijire pentru diagnosticarea bolii utilizează principiile ELISA.

ELISA pentru diagnosticare

 ELISA sau imunotestele enzimatice (EIA) sunt utilizate frecvent în testele de diagnostic clinic;  multe sunt validate și disponibile comercial ca truse care conțin toți reactivii necesari pentru efectuarea testului, permițând laboratoarelor să aibă acces la proceduri standardizate.

 Testele ELISA detectează imunoglobulinele produse ca parte a unui răspuns imun sau alergic, permițând diagnosticarea infecțiilor și a bolilor alergice, cum ar fi ALERGIILE ALIMENTARE.  Alternativ, ELISA poate fi utilizat pentru a identifica agenți cauzali prin detectarea antigenului, cum ar fi alergeni, particule de virus sau bacterii, permițând identificarea bolii infecțioase.

Mai multe detalii AICI

Vezi și testul Western Blotting